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Meilunbio活死細菌染色試劑盒(可應用流式分析)
LIVE/DEADBacterial Viability and Counting Kit
for flow cytometry
產品貨號：MA0390 100T [￥4500.00]
http://m.jagif.com/goods.php?id=22922
美侖活死細菌染色試劑盒（LIVE/DEAD Bacterial Viability and Counting Kit, for flow cytometry）可以通過流式細胞儀有效的區分活、死細菌并實現定量檢測；而且對各類細菌的混合物也可以實現定量分析檢測。該試劑盒采用兩種核酸染料來進行細菌活力測定：綠色熒光染料meilungreen（美侖自主研發，功能等同于SYTO 9）以及紅色熒光染料PI（碘化丙啶），并通過標準微球精準測量樣品體積。用適當比例的meilungreen與PI混合物染色時，細胞膜完好的細菌發出明亮的綠色熒光，而細胞膜受損的細菌則表現出綠色熒光明顯減弱，同時發出較強的紅色熒光。細胞類型和革蘭氏特征會影響死細菌產生紅色熒光的強度。meilungreen與PI染料在大部分流式細胞儀中都是由488nm激光器實現有效激發的，各自的核酸復合物熒光信號可分別在綠色通道和紅色通道中檢測到，并且幾乎沒有背景熒光。
標準微球懸浮液作為樣品體積的參考標準，尺寸和熒光經過仔細篩選，以確保微球在流式細胞檢測中熒光--側向散射圖中可以明顯的區別于被染色的細菌。用meilungreen和PI對細菌培養液進行簡單染色，在流式細胞儀上分析樣本前加入固定數量的微球。活菌和死菌以及微球在熒光--側向散射圖中很容易區分，然后通過細胞圖中細菌事件數與微球事件數的比值來計算死菌和活菌的濃度（見下方圖1）。
細菌活力標準：
細菌的生存能力不能用簡單的生理或者形態參數來定義，因此單一的生存能力測定可能會在實驗中引入一定的偏差。某些條件下，細菌受損的細胞膜可能會修復，即使是這種細菌在實驗中也可能被標記為“死”細菌。相反，一些細胞膜完整的細菌可能無法在營養培養基中繁殖，但卻被認定為“活”細菌。結合幾種不同的生存能力測定方法，如膜滲透性、酶活性和氧化還原電位，可以更全面地評估細菌的生存能力，并消除任何單一生存能力測定方法的固有限制。
對比實驗
以事實為依據，與進口對比毫不遜色
1. 革蘭氏陰性菌（大腸桿菌為例）活死細菌染色流式檢測結果對比
圖1：大腸桿菌活死細菌染色流式檢測結果。大腸桿菌的活菌（未處理）、死菌（70%乙醇處理）懸液按一定比例混合，分別采用本試劑盒和進口品牌試劑盒進行流式檢測。通過綠色熒光或者紅色熒光對側向散射結果圖，分別圈出細菌群與標準微球群，然后通過綠色熒光對紅色熒光流式結果圖展示細菌群的分布。活、死菌的濃度計算可以通過綠色或者紅色熒光對側向散射流式結果圖、或者綠色熒光對紅色熒光流式結果圖，根據實際情況選擇活死菌分群最明顯的結果圖來進行計算。活、死菌群的分布位置會因細菌種類和參數設置而存在差別，一些點會分布于劃定區域以外，也應進行適當的評估。結果顯示美侖活死細菌染色試劑盒檢測效果媲美進口品牌。
2. 革蘭氏陽性菌（乳酸桿菌為例）活死細菌染色流式檢測結果對比
圖2：乳酸桿菌活死細菌染色流式檢測結果。乳酸桿菌的活菌（未處理）、死菌（電穿孔處理）懸液按一定比例混合，分別采用本試劑盒和進口品牌試劑盒進行流式檢測。通過綠色熒光或者紅色熒光對側向散射結果圖，分別圈出細菌群與標準微球群，然后通過綠色熒光對紅色熒光流式結果圖展示細菌群的分布。活、死菌的濃度計算可以通過綠色或者紅色熒光對側向散射流式結果圖、或者綠色熒光對紅色熒光流式結果圖，根據實際情況選擇活死菌分群最明顯的結果圖來進行計算。活、死菌群的分布位置會因細菌種類和參數設置而存在差別，一些點會分布于劃定區域以外，也應進行適當的評估。結果顯示美侖活死細菌染色試劑盒檢測效果媲美進口品牌。圖3. 使用美侖CCK-8對細胞狀態的影響。
操作簡易流程&適用菌種范圍
1. 準備菌懸液
2. 細菌染色
3. 制備單染管進行設備調節
4. 流式細胞儀檢測染色后的細菌
5. 計算：菌濃度=(菌群分布區事件數×稀釋倍數)/(微球分布區事件數×5×10-6)/ ml
本試劑盒適用菌種廣泛，主要包括：蠟樣芽胞桿菌、枯草桿菌、產氣莢膜梭菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、黃體微球菌、草分枝桿菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、沙雷菌、宋內志賀菌、金黃色葡萄球菌和釀膿鏈球菌等。以上菌種通過該試劑盒檢測的計數結果均能夠與標準平板計數結果表現出良好的相關性。
其他信息請參考說明書。
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